Tripsinizarea este procesul de disociere celulară folosind tripsina, o enzimă proteolitică care descompune proteinele, pentru a disocia celulele aderente de vasul în care sunt cultivate. Când este adăugată la o cultură celulară, tripsina descompune proteinele care permit celulelor să adere la vas.
De ce tripsinizăm celulele?
Tripsinizarea se face adesea pentru a permite trecerea celulelor într-un nou container, observarea pentru experimentare sau reducerea gradului de confluență în balon prin îndepărtarea unui procent de celulele.
Cum funcționează tripsina pentru a detașa celulele?
Trypsin/EDTA este o metodă combinată pentru detașarea celulelor. Tripsina taie proteinele de adeziune în interacțiunile celulă-celulă și celulă-matrice prin tăierea aminoacidului proteinelor de adeziune în mod specific la lizină sau aginină pe C-terminal dacă aminoaciduldin amonte nu este prolină.
Cum obțineți celule aderente tripsinizate?
Procedură
- Se îndepărtează mediul din vasul de cultură prin aspirație și se spală monostratul cu o soluție de sare fără Ca2+ și Mg 2+ pentru a elimina toate urmele de ser. …
- Distribuiți suficientă tripsină sau soluție de tripsină/EDTA în vasele de cultură pentru a acoperi complet monostratul de celule și plasați într-un incubator la 37 °C timp de ~2 minute.
Cum pot dezactiva tripsina în cultura celulară?
Odată ce celulele apar detașate, adăugați 2 volumede mediu de creștere complet preîncălzit pentru a inactivatripsina. Dispersați ușor mediul prin pipettare peste suprafața stratului celular de mai multe ori pentru a asigura recuperarea a >95% din celule. Pentru culturi fără ser, inhibitor de tripsină din soia (nr. produs
