Odată ce celulele apar detașate, adăugați 2 volume de mediu de creștere complet preîncălzit pentru a dezactiva tripsina. Dispersați ușor mediul prin pipettare peste suprafața stratului celular de mai multe ori pentru a asigura recuperarea a >95% din celule.
Cum pot opri activitatea tripsinei?
Digestia tripsinei poate fi oprită prin înghețare sau prin scăderea pH-ului reacției sub pH 4 prin adăugarea de acid formic, acetic sau trifluoracetic (tripsina își va recăpăta activitatea când pH-ul este crescut peste pH 4). Probele digerate pot fi păstrate la -20°C.
Ce neutralizează tripsina?
Un tampon conținând ioni de calciu și magneziu va încetini și activitatea tripsinei. Cu toate acestea, FBS este modalitatea mai eficientă de a inhiba activitatea tripsinei.
Serul inactivează tripsina?
Serul inactivează tripsina reziduală rămasă din digestia enzimatică a rinichilor și enzimele proteolitice sintetizate ulterior de celule. Celulele proaspăt tripsinizate ar putea fi crescute în monostraturi în absența serului, cu condiția ca acestea să fie spălate în mod repetat pentru a elimina tripsina reziduală.
Cât media este nevoie pentru a dezactiva tripsina?
Atâta timp cât utilizați proporția de cel puțin 1:1 de mediu care conține 5-10% ser cu tripsina, ar trebui să existe o inhibiție mai mult decât suficientă, urmată de centrifugare și schimb mediu cu mediu proaspăt.
