Artefactele dimerului de amorsare apar de obicei la un număr mare de ciclu de prag (de obicei > 35 de cicluri), care este mai mare decât numărul de ciclu de prag pentru ampliconul dorit. Dimerii primerului cresc semnificativ atunci când se adaugă ADN genomic heterolog.
Unde ați vedea dimerii de primer pe un gel ADN?
În PCR final necantitativ, dimerul primerului va apărea ca un frotiu mai mult sau mai puțin slab pe un gel de agaroză, sub banda de interes al produsului.
Cum se formează dimerii de grund?
Dimerii de primer se formează când doi primeri se leagă unul de altul, în loc de ADN-ul șablon, datorită regiunilor de complementaritate a primerului.
Cum detectați dimerii de grund?
Cea mai ușoară modalitate de a verifica dimerii de primer este de a vă compara reacțiile cu controlul negativ (apă în loc de ADN sau ARN). Dimerii de primer se vor forma în continuare în controlul negativ. Unele seturi de grunduri au mai multe șanse să formeze dimeri decât altele.
De ce apar dimerii de grund?
În cea mai mare parte, se văd dimeri de primer datorită concentrației mari a primerului în amestecul de reacție PCR. Sau dacă nu există o amplificare PCR și puteți vedea dimerul de primer în gelul de agaroză. Dacă puteți vedea produsul PCR, puteți reduce concentrația primului și puteți păstra celel alte condiții la fel.
